Kana adrenomedulliini (ADM) reaktiivi valmistamine ja nõuded

1. Seerum: koagulatsioon toatemperatuuril 10-20 min, tsentrifuugimine 20 minutit kiirusel 2000-3000 r.pm. Koguge supernatant hoolikalt ja tsentrifuugige uuesti, kui ladustamise ajal ilmnevad sademed.

2. Plasma: EDTA või naatriumtsitraat tuleks valida antikoagulandiks vastavalt proovi nõuetele. Pärast segamist 10-20 minutit tsentrifuugitakse 20 minutit kiirusel 2000-3000 r.pm. Koguge supernatant hoolikalt ja tsentrifuugige uuesti, kui ladustamise ajal tekib sademeid.

3. Uriin: koguda steriilse toruga, tsentrifuugida 20 minutit kiirusel 2000-3000 r.pm. Koguge supernatant hoolikalt ja tsentrifuugige uuesti, kui ladustamise ajal tekib sademeid. Rindkere- ja kõhuvedelik, tserebrospinaalvedeliku referents.

4. Rakukultuuri supernatant: koguda steriilse toruga eksudatiivsete komponentide avastamisel. Tsentrifuugitakse 20 minutit kiirusel 2000-3000 r.pm. Koguge supernatant hoolikalt. Komponentide avastamisel rakkudes lahjendati rakususpensiooni PBS-iga (pH 7, 2- 7, 4) ja raku kontsentratsioon ulatus umbes 1 miljonini ml kohta. Korduva külmutamise ja sulatamise kaudu hävitatakse rakud ja rakusisesed komponendid vabanevad. Tsentrifuugitakse 20 minutit kiirusel 2000-3000 r.pm. Koguge supernatant hoolikalt. Kui säilitamise ajal tekib sademeid, tsentrifuugitakse uuesti.

5. Koeproov: pärast proovi lõikamist kaaluge see. Lisatakse teatav kogus PBS-i PH7.4. Kiire krüokonserveerimine vedelas lämmastikus hilisemaks kasutamiseks. Pärast sulatamist jääb proov temperatuurile 2-8 °C. Lisati teatav kogus PBS-i (PH7.4) ja isend homogeniseeriti täielikult käsitsi või homogenisaatoriga. Tsentrifuugitakse 20 minutit kiirusel 2000-3000 r.pm. Koguge supernatant hoolikalt. Jagage üks testimiseks ja külmutage ülejäänud reservi jaoks.

6. Isendid tuleks ekstraheerida võimalikult kiiresti pärast kogumist. Ekstraheerimine peaks toimuma vastavalt asjakohasele kirjandusele ja katsed tuleks teha võimalikult kiiresti pärast ekstraheerimist. Kui katset ei ole võimalik kohe teha, võib proovi hoida temperatuuril -20 °C, kuid vältida tuleks korduvat külmutamist ja sulatamist.

7. NaN3 sisaldavat proovi ei saa tuvastada, kuna NaN3 pärsib HRP aktiivsust.